Изучение влияния соединений РГПУ-135 на формирование
сенсорно-двигательных рефлексов и физическое развитие
потомства от крыс с экспериментальным гестозом
Артамонов Евгений Михайлович
Гестоз (преэклампсия) является наиболее тяжелым осложнением беременности, представляющим серьезную опасность для жизни матери и ребенка. В результате морфофункциональных изменений в плаценте происходит задержка развития плода, зачастую оканчивающаяся гибелью. У каждого пятого ребенка, родившегося от матери с гестозом, имеются нарушения физического и психоэмоционального развития, значительно возрастает заболеваемость в младенческом и раннем детском возрасте. В этой связи актуальным является поиск новых средств для профилактики и лечения гестоза у женщин, а также коррекции состояния здоровья детей, рожденных от матерей с осложненной беременностью.Таким образом, целью нашего исследования явилось изучение влияния производного глутаминовой кислоты - соединения РГПУ – 135 на физическое развитие и формирование сенсорно – двигательных рефлексов потомства крыс с экспериментальном гестозом.
Задачи исследования:
1) Моделирование экспериментального гестоза путем замены питьевой воды на 1,8 % р-р NaCl беременным самкам с 7-го по 21-ый день беременности.
2) Оценка действия соединения РГПУ – 135 на проявления экспериментального гестоза: АД, уровень белка в моче, вынашивание и родоразрешение.
3) Изучение влияния соединения РГПУ – 135 на физическое развитие потомства самок с экспериментальным гестозом.
4) Изучение влияния соединения РГПУ – 135 на формирование сенсорно – двигательных рефлексов.
Материалы и методы. Экспериментальный гестоз (ЭГ) моделировался на белых беспородных крысах-самках массой 220-240 г путем замены питьевой воды на 1,8 % раствор хлорида натрия с 7 по 20-й день гестации. Были сформированы следующие группы животных: группа позитивного контроля (беременные самки без ЭГ); группа негативного контроля (беременные самки с ЭГ, получавшие физиологический раствор); опытная группа №1 (беременные самки с ЭГ, получавшие соединение РГПУ-135 в дозе 26 мг/кг); опытная группа №2 (беременные самки с ЭГ, получавшие препарат сравнения сулодексид в дозе 30 мг/кг). Соединение вводилось перорально ежедневно с седьмого дня гестации и до родов.
АД: Артериальное давление измерялось у бодрствующих беременных крыс в первый и последний дни гестации с использованием системы для не инвазивного измерения. Для этого самка помещалась в домик, на хвост одевался манжет и датчик, после чего производилось измерение.
Белок: Определение концентрации белка в суточной моче проводилось с использованием набора реагентов «Ольвекс диагностикум на спектрофотометре. Сбор суточной мочи проводился в метаболических камерах до и на 20 день беременности).
Для определения наличия отеков у декапитированных животных забирались кусочки жировой, мышечной тканей и мозга, инкубировались в термостате при t-370 в течение 24 часов, по уменьшению в % массы препаратов до и после инкубации судили о степени выраженности отеков.
Оценка физического развития потомства от самок с ЭГ.
Отлипание ушной раковины наблюдали со 2-го дня постнатального периода.
Появление первичного волосяного покрова у потомства регистрировали с 4-го дня после рождения.
Прорезывание резцов у крысят наблюдали с 6-го дня постнатального периода.
Открытие глаз регистрировали с 12–го дня после рождения.
Опускание семенников наблюдали на 25 день постнатального периода.
Открытие влагалища наблюдали на 30-й день после рождения.
Изучение формирования и развития сенсорно-двигательных рефлексов у потомства от самок с ЭГ.
Эксперимент «Переворачивание на плоскости» проводился со 2-го дня постнатального периода
Эксперимент «Отрицательный геотаксис» проводили со 2-го дня после рождения.
Эксперимент «Избегание обрыва» проводили с 6-го дня постнатального развития потомства.
Реакцию на акустический стимул проверяли у потомства с 8-го дня после рождения.
Поднимание головы и передних лап потомства крыс регистрировали на 8-9-й день. Ползание крысят наблюдали на 9 день жизни.
Реакцию на обонятельный стимул у крысят наблюдали с 10-го дня развития.
Опора на задние конечности, подъем всего тела регистрировали на 13-й день.
Эксперимент «Избегание обрыва (вызванное визуальным стимулом)» проводили на 14-й день.
Эксперимент «Мышечная сила» проводился на 15-й день постнатального развития.
Переворачивание в свободном падении регистрировали на 17-й день.
Результаты собственных исследований
В результате проведенных экспериментов было выявлено, что артериальное давление у беременных самок без ЭГ в начале гестации и на 20-й день беременности практически не изменилось. У самок, получавших 1,8% раствор NaCl в период беременности, повышение уровня артериального давления составило 11%. Отмечено, что соединение РГПУ – 135 предотвращает увеличение артериального давления.
У самок позитивного контроля количество белка в моче с первого по 20-й день гестации повысился на 66,4%, тогда как у группы самок негативного контроля намного выше - на 178%. У самок, получавших соединение РГПУ – 135 гиперпротеинурия была менее выражена.
Степень гидратации тканей у самок, которым вводили 1,8% NaCl была выше, чем у животных позитивного контроля, преимущественно в жировой ткани на 25,8%.
В группе животных, получавших 1,8% раствор NaCl, у 3-х самок из 10-ти отмечены случаи мертворождения потомства, 1 самка умерла на 4-ый день после родов. Соединение РГПУ – 135 предотвращает гибель самок в послеродовом периоде.
У самок, получавших вместо питьевой воды 1,8% раствор NaCl отмечается высокий процент мертворожденных крысят и погибших в разные сроки постнатального периода. Соединение РГПУ-135 и сулодексид способствует снижению количества случаев гибели крысят в постнатальный период.
У потомства группы негативного контроля прорезывание резцов отмечалось на 13-е сутки постнатального периода, в группе позитивного контроля и во всех опытных группах - на 10-е сутки.
Открытие глаз у крысят группы негативного контроля происходило на 19-е сутки, у животных группы позитивного контроля – на 18-е сутки. У потомства от самок, получавших соединение РГПУ-135, показатель отмечен на 17-е сутки.
Время удержания на горизонтальной сетке у потомства животных из группы негативного контроля составило 20,2 с, в группе крысят от самок позитивного контроля – 26,3 с. Соединение РГПУ-135 и препарат сравнения сулодексид способствовали существенному увеличению показателя в сравнении с группой негативного контроля, о чем свидетельствует более длительное время удержания крысят на горизонтальной сетке (32,8 и 28,2с соответственно).
Тест «отрицательный геотаксис» крысята, рожденные от самок с ЭГ, выполняли на 10-е сутки, потомство от самок с неосложненной беременностью – на 8-е сутки, крысята, родившиеся от самок с ЭГ, получавших соединения РГПУ-135 - на 8-е сутки, от самок, которым вводился сулодексид - на 9-е сутки.
Тест «избегание обрыва» потомство от самок группы негативного контроля выполняло на 10-е сутки, крысята, рожденные самками без ЭГ - на 7-е сутки. Соединение РГПУ-135 способствовало формированию рефлекса – на 8-е сутки. В опытной группе № 2 рефлекс был сформирован на 7-е сутки.
Реакция на акустический стимул у крысят от самок с ЭГ наблюдалась на 13-е сутки, от самок без ЭГ – на 10-е. Под действием соединения РГПУ-135 данный рефлекс формировался раньше, чем под влиянием сулодексида (10-е, 11-е сутки соответственно).
Обонятельная реакция у потомства от самок негативного контроля отмечалась на 17-е сутки, у группы позитивного контроля - на 14-е сутки. Соединение РГПУ-135 и сулодексид способствовали формированию реакции на 15-е сутки.
Таким образом, исследуемое соединение ограничивает негативное действие экспериментального гестоза на потомство, о чем свидетельствует более раннее формирование у них сенсорно-двигательных рефлексов и физическое развитие. При этом соединение РГПУ-135 оказывает выраженное влияние на развитие обоняния, слуховой чувствительности, координацию движений, мышечную силу. Возможно, это связано с тем, что соединение РГПУ-135 является производным глутаминовой кислоты - важнейшего нейромедиатора в ЦНС, который играет существенную роль в процессах нейропластичности, способствует синтезу АТФ и повышает проницаемость мышечных клеток для ионов калия, что усиливает процессы мышечного сокращения.
Выводы:
- Замена питьевой воды на 1,8 раствор NaCl во время беременности способствует развитию экспериментального гестоза, о чем свидетельствует повышение АД, гиперпротеинурия и отеки у беременных самок.
- Соединение РГПУ – 135 ограничивает проявления экспериментального гестоза, на что указывает отсутствие увеличения артериального давления, менее выраженная гиперпротеинурия, снижение количества случаев мертворождения и гибели потомства крыс с ЭГ.
- Соединение РГПУ – 135 улучшает физическое развитие потомства крыс с экспериментальным гестозом, о чем свидетельствуют более ранние сроки отлипания ушной раковины, прорезывания резцов и открытия глаз у потомства крыс с ЭГ.
- Соединение РГПУ – 135 положительно влияет на формирование и развитие вестибулярной функции, координации движений, мышечной силы и тонуса.
